產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:Phospho-eIF2 alpha (Ser51) 磷酸化真核啟動因子2α抗體 規(guī)格: 0.1ml
RASAL1 RAS蛋白樣激活劑1抗體 規(guī)格: 0.2ml
PRODH 脯氨酸脫酶抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-CAMK2G (Ter286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶CAMK2G抗體 規(guī)格: 0.1ml
更新時間:2022-02-25
操作流程:
收集基因信息——>設(shè)計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)檢測試劑盒 | 50T | FS-01H4425 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實(shí)時熒光定量PCR:
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時,內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測
VEGF蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 25次
細(xì)胞BAD蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒 10/20次
載玻細(xì)胞BAD蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
冰凍切組織BAD蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
石蠟切組織BAD蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
載玻細(xì)胞BAD蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
冰凍切組織BAD蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
石蠟切組織BAD蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 10/20次
細(xì)胞BAD蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒 10/50 次
細(xì)胞BAD蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒 10/50 次
腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)檢測試劑盒ALOX12/12 Lipoxygenase 12脂氧合抗體 0.1mlSubstance P P物質(zhì)抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-dog IgG/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1ml
phospho-p95 NBS1(Ser343) 磷化滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-MST1R(Tyr1353) 磷化原基因c-Met相關(guān)激抗體 規(guī)格: 0.1ml
Bcr Bcr抗體 規(guī)格: 0.2ml
ERM/Etv5 轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體 規(guī)格: 0.2mlhHBrk1 微絲相關(guān)hHBrk1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Blood Group Kell Antigen/CD238 凱爾型糖CD238抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mouse Anti-Rabbit IgM 小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 1mg
phospho-GATA1(ser310) 磷化珠轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cathepsin Z 組織z抗體 規(guī)格: 0.1mlEntactin/Nidogen 巢1抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD44v4 CD44V4抗體 規(guī)格: 0.1ml
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。